Темнопольная микроскопия

Темнопольная микроскопия
Схема темнопольной микроскопии в падающем свете.
Подсветка образца осуществляется сбоку (зеленая линия). Изображение создается светом, рассеивающимся на неоднородностях образца.

Темнопо́льная микроскопи́я — вид оптической микроскопии, в которой контраст изображения увеличивают за счет регистрации только света, рассеянного изучаемым образцом. При использовании метода темного поля регистрируются даже незначительные различия в преломляющей способности участков препарата [1]. Основы метода разработаны Р. Зигмонди в 1906 году.

Содержание

Принцип действия

В оптической микроскопии тёмного поля неоднородности образца рассеивают свет, и этот рассеянный свет формирует изображение исследуемого образца.

Особенностью микроскопа темного поля является способ освещения образца, который осуществляется «сбоку» (зеленая полоса на рисунке). При таком освещении неоднородности, имеющиеся в образце, рассеивают падающий свет и в микроскопе изображение образца наблюдают в рассеянном свете, а освещающий свет «напрямую» не попадает в объектив. Такое освещение называется эпи-подсветкой (EPI-illuminator, EPI—microscope, EPI-objective lens).

Для прозрачных объектов возможно и контровое освещение, но при этом необходимы дополнительные действия, чтобы убрать "прямое поле": необходимо провести фурье-преобразование полученного изображения и удалить из полученной суммы компоненту, соответствующую "опорной" волне. Это можно сделать, например, с помощью линзы и шаблона, закрывающего небольшой участок в плоскости, где линзой фокусируется "опорная" световая волна. Затем, с помощью второй линзы проводят обратное преобразование Фурье и наблюдают полученную картину визуально. При этом контраст исходного изображения существенно возрастает.

В микроскопах использование метода тёмного поля может быть предусмотрено конструкцией[2] или реализуется установкой дополнительных узлов, таких, как конденсор темного поля ОИ-13.

Преимущества и недостатки

Изображение мизиды, полученное способом темнопольной микроскопии

Темнопольная микроскопия хорошо подходит для получения изображений живых и неокрашенных биологических образцов, таких, как отдельные водные одноклеточные организмы.

Основным ограничивающим фактором метода является то, что только малая часть падающего света в итоге формирует изображение, поэтому необходимо применять достаточно мощные источники света, что иногда приводит к повреждениям образца (сейчас иногда используют лазеры).

Темнопольная микроскопия практически лишена артефактов[источник не указан 988 дней]. Однако, интерпретация получаемых изображений требует большой осторожности, поскольку некоторые детали, не видные методом светлопольной микроскопии, видны методом темнопольной микроскопии, и наоборот. На первый взгляд можно было бы сделать предположение, что изображение, получаемое темнопольным методом является просто негативом по отношению к получаемым светопольным методом[источник не указан 988 дней], однако, на самом деле, каждый из этих методов делает видимым разные особенности образца. В светлопольной микроскопии особенности видимы, если они или производят тени, или имеют отличный от окружения коэффициент преломления и при этом достаточно резкие, в то время как, например, плавные неоднородности не могут быть наблюдаемы этим методом, однако, хорошо заметны на картинках, получаемых методом темнопольной микроскопии.

Применение

Темнопольная микроскопия может применяться для прижизненного изучения неокрашенных биологических объектов — простейших, изолированных клеток, тканевых культур, для исследования субклеточных структур живых неокрашенных клеток [1].

Темнопольная микроскопия в последнее время используется в производстве компьютерных мышей[3] с тем чтобы обеспечить работу оптических мышей в том числе и на прозрачных стёклах, имеющих микроскопические дефекты или пыль на поверхности.

{{{box_caption}}}
{{{box_caption}}}
Одна и та же полированная алмазная пластинка: слева — при наблюдении методом светлого поля, справа — методом тёмного поля.

См. также

Примечания

  1. 1 2 Микроскопическая техника Роскин Г. И. М.: Изд. «Советская наука», 1946
  2. Микроскоп биологический исследовательский универсальный МБИ-15 — техническое описание и инструкция по эксплуатации, ЛОМО 1979
  3. Марина Камаева Обзор Logitech Anywhere MX Wireless Mouse  (рус.). Компьютерная газета. Архивировано из первоисточника 20 апреля 2012. Проверено 26 марта 2010.



Wikimedia Foundation. 2010.

Игры ⚽ Поможем решить контрольную работу

Полезное


Смотреть что такое "Темнопольная микроскопия" в других словарях:

  • Темнопольная микроскопия — см. Микроскопия в темнопольном микроскопе. (Источник: «Словарь терминов микробиологии») …   Словарь микробиологии

  • темнопольная микроскопия — dark field microscopy микроскопия в темном поле, темнопольная микроскопия. Mетод световой микроскопии не поглощающих света объектов (прозрачных и т.п.), основанный на освещении их косыми лучами при этом объект становится виден светящимся (но в… …   Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

  • ТЕМНОПОЛЬНАЯ МИКРОСКОПИЯ — темнопольная микроскопия, см. Микроскоп, Микроскопия …   Ветеринарный энциклопедический словарь

  • микроскопия в темном поле — темнопольная микроскопия Метод световой микроскопии не поглощающих света объектов (прозрачных и т.п.), основанный на освещении их косыми лучами при этом объект становится виден светящимся (но в ореоле, что затрудняет анализ формы его мелких… …   Справочник технического переводчика

  • микроскопия в темном поле — микроскопия в темном поле. См. темнопольная микроскопия. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) …   Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

  • Темнопольная оптическая микроскопия — Схема темнопольной микроскопии в падающем свете. Подсветка образца осуществляется сбоку (зеленая линия). Изображение создается светом, рассеивающимся на неоднородностях образца. Темнопольная оптическая микроскопия  вид оптической микроскопии …   Википедия

  • микроскопия — совокупность методов изучения малых объектов с помощью микроскопов. К традиционным видам М. относятся–люминесцентная М. – основана на явлении фотолюминесценции, возникающей при окраске препаратов специальными люминесцентными красителями;… …   Словарь микробиологии

  • микроскопия темнопольная — М. неокрашенных объектов на темном фоне при боковом освещении …   Большой медицинский словарь

  • Ближнепольная оптическая микроскопия — (БОМ) оптическая микроскопия, обеспечивающая разрешение лучшее, чем у обычного оптического микроскопа. Повышение разрешения БОМа достигается детектированием рассеяния света от изучаемого объекта на расстояниях меньших, чем длина волны света.… …   Википедия

  • Клетка — У этого термина существуют и другие значения, см. Клетка (значения). Клетки крови человека (РЭМ) …   Википедия


Поделиться ссылкой на выделенное

Прямая ссылка:
Нажмите правой клавишей мыши и выберите «Копировать ссылку»